RPA 恒温扩增技术：核酸检测的新星

在分子生物学和医学诊断领域，核酸扩增技术一直扮演着至关重要的角色。近年来，一种名为RPA（Recombinase Polymerase Amplification）的恒温扩增技术逐渐引起了科研人员的广泛关注。这项创新技术不仅操作简便，而且在速度和灵敏度方面展现出令人瞩目的优势

RPA 技术的原理与特点

RPA技术的核心在于其独特的反应机制。它巧妙地模拟了生物体内的 DNA 复制过程，通过三类关键酶的协同作用实现核酸的快速扩增：

● 重组酶：负责识别并结合特定的 DNA 序列。

● 单链 DNA 结合蛋白（SSB）：稳定已打开的 DNA 双链。

● 链置换 DNA 聚合酶：进行 DNA 的合成。

这种反应可以在 37-42°C 的恒温条件下进行，无需传统 PCR 那样的复杂温度循环过程。更令人惊叹的是，RPA反应通常只需 10-30 分钟就能完成，大大缩短了检测时间。

RPA 技术的优势

相比传统的核酸扩增方法，RPA 技术具有多方面的优势：

● 操作简便：无需专业的热循环仪，甚至可以用简单的恒温水浴完成反应。

● 反应迅速：从开始到获得结果，整个过程可在半小时内完成。

● 高灵敏度：能够检测极低浓度的核酸模板。

● 适应性强：可在室温或接近体温的条件下进行，非常适合现场快速检测。

● 试剂稳定：试剂可以冻干保存，无需冷链运输，大大提高了在野外或资源匮乏地区的应用潜力。

应用前景广阔

RPA 技术的这些特点使其在多个领域展现出巨大的应用潜力：

● 临床诊断：快速检测病原体，尤其适用于急诊和基层医疗机构。

● 食品安全：快速检测食品中的病原微生物或转基因成分。

● 动物疫病防控：现场快速诊断，有助于及时采取防控措施。

● 环境监测：检测水体或土壤中的特定微生物或污染物。

此外，RPA 技术还支持多重检测，即在同一反应中同时检测多个目标。通过精心设计的引物组合，可以实现对多种病原体的同时筛查，进一步提高了检测效率。

赛百盛的全方位 RPA 解决方案

赛百盛致力于为科研和应用领域提供先进的 RPA 解决方案。我们的产品线包括：

T4 UvsX Recombinase: T4 UvsX 是 RPA 反应的核心酶，属于 RecA/Rad51 重组酶家族。它的主要作用是:

● 与单链 DNA 引物结合形成核蛋白丝

● 搜索同源双链 DNA 序列

● 催化 DNA 链交换反应，启动 DNA 合成过程

T4 UvsY Protein: UvsY 是一种重组介导蛋白，在 RPA 中起到辅助作用:

● 促进 UvsX 与单链 DNA 的结合

● 稳定 UvsX-DNA 复合物

● 协助置换单链 DNA 结合蛋白(如 Gp32)

T4 Gene 32 Protein (Gp32): Gp32 是 T4 噬菌体的单链 DNA 结合蛋白，在 RPA 中的作用包括:

● 结合并稳定单链 DNA

● 消除 DNA 二级结构

● 与 UvsY 协同作用，促进 UvsX 与 DNA 的结合

Bsu DNA Polymerase / Sau DNA Polymerase: 链置换 DNA 聚合酶，负责 DNA 的合成:

● 在引物 3'端延伸新链

● 具有链置换活性，可以置换原有的互补链

Exonuclease III: 一种 3'→5'外切酶，在 RPA 中用于:

● 修剪 DNA 末端

● 去除非特异性扩增产物

Bst DNA/RNA Polymerase: 一种耐热 DNA 聚合酶，可以用于 DNA 合成。此外，它也具有逆转录酶活性，可以用于 RNA 模板的扩增。

Endonuclease IV: 一种 DNA 修复酶，在 RPA 中用于处理 DNA 损伤位点并提高扩增的准确性。

这些酶在 RPA 反应中相互配合，共同实现快速、高效、特异性的核酸扩增。UvsX、UvsY 和 Gp32 构成了 RPA 的核心重组系统，而其他酶则在 DNA 合成、修饰和修复方面发挥作用，确保扩增的效率和准确性。

此外，我们的新一代RPA Multiplex Fluorescent Lyophilized Kit (Gen-4) 试剂盒经过优化设计，具有以下特点：

● 多重扩增支持：通过单次反应实现多个目标的检测，提升效率。

● 防污染设计：确保实验结果的可靠性。

● 超高灵敏度：适用于检测极低浓度的核酸模板。

● 冻干试剂：便于储存和运输，尤其适合野外和资源匮乏地区的应用。

未来展望

RPA技术的出现为核酸检测领域带来了新的可能性。它不仅可能在某些应用场景下替代传统的PCR技术，还有望推动即时检测（Point-of-Care Testing, POCT）的发展，为疾病诊断、食品安全和环境监测等领域带来革命性的变化。

赛百盛不断创新，致力于将先进的 RPA 技术带给全球用户。无论您是在研究机构、医疗机构、食品安全检测实验室，还是在野外环境监测，我们的 RPA 解决方案都能满足您的需求。